ГРИПП и ОРВИ

ГРИПП и ОРВИ
«Утверждаю» Директор Ленинградского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера Т.В. Перадзе 1988г.

 

Отчет о лабораторных испытаниях противовирусной активности препарата ГМДП1 в отношении экспериментальной гриппозной инфекции.

Исследования проводили на модели экспериментальной гриппозной инфекции с использованием аллантоисной культуры вируса штамм А/Ленинград/399/76 (Н3N2). Лабораторные животные – мыши линии СВА, С57ВL/6 и беспородные белые мыши.
Определение иммуностимулирующего действия
Исследования, проведенные ранее, показали, что ГМДП обладал иммуностимулирующей активностью в отношении инактивированной хроматографической гриппозной вакцины. Иммуностимулирующее действие зависело не только от дозы препарата, но в значительной степени и от дозы антигена. Аппликация иммуностимулятора при повторной вакцинации позволяла получить двукратный прирост антител при дозе препарата 1-2 мкг на мышь и при использовании вакцины 0,9 мкг ГА. Зафиксированное нарастание титра антител под действием препарата способствовало защите животных от инфицирования. Заражение вирусом гриппа типа А однократно вакцинированных мышей, получавших и не получавших препарат, подтвердило выявленную ранее зависимость развития функционального от уровня антигемагглютининов. Созданный малой дозой антигена (0,9 мкг ГА/мышь) иммунитет не смог защитить мышей от инфицирования 1000ИД50 вируса, однако, в отличие от невакцинированных, титр вируса в легких мышей этой группы был более чем на 2 порядка ниже. Мыши, получившие одновременно ГМДП, были почти полностью защищены от инфицирования указанной выше дозой вируса на фоне двукратного увеличения титра гуморальных антител. Средний логарифм титра вируса в легких мышей контрольной, иммунной и получившей ГМДП групп составлял соответственно – 3,4; 1,0; 0,3 lg. Сравнительное изучение различных способов введения препарата показало, что наряду с внутривенным и внутрибрюшинным методами может быть использован и пероральный способ его аппликации. Средний геометрический титр антител при двух последних способах составлял соответственно 362 и 388 при 208 в контроле. Изучение возможности иммуностимуляции на разные сроки по отношению к введению антигена показало, что упомянутый препарат обладает довольно широким диапазоном действия во времени.  Введение его животным за 7 суток до вакцинации стимулировало двукратное нарастание титра антител по отношению к контролю (средний геометрический титр 1560 и 632 соответственно), несколько меньшая активность получена при введении ГМДП на 1-4 сутки спустя после вакцинации.
Определение антиинфекционного действия ГМДП.
Для заражения мышей применяли аллантоисную культуру вируса гриппа штамм А/Ленинград/399/76 (Н3N2). Животных заражали интраназально, под легким эфирным наркозом, 1-10 ИД50. Введение препарата в дозе 10 мкг/мышь на разные сроки по отношению к заражению показало, что оптимальным по эффективности является время 24 часа спустя после заражения. В этом случае зафиксировано снижение вируса в легких на 1 lg и более во всех опыта. Введение препарата за 4 часа до инфицирования позволяло зарегистрировать снижение титра вируса в двух третях опытов. Уменьшение дозы препарата до 5 мкг/мышь влекло за собой получение менее постоянных результатов независимо от сроков его введения. Путь введения препаратов не имел значения. Сравнение антивирусной активности ГМДП с известным в экспериментальной практике антивирусным препаратом виразолом (рибавирин) выявило идентичную противовирусную активность обоих препаратов при использовании 1 заражающей дозы вируса. Снижение содержания вируса в легких под влиянием перечисленных препаратов на 2 и 4 сутки с момента заражения мышей составляло 1,6 – 2,0 lg. Также показано, что ГМДП, не сокращая частоту вирусемии, уменьшал накопление вируса в печени каждой отдельной мыши. Таким образом, установлены иммуностимулирующие свойства ГМДП в отношении вирионной гриппозной вакцины. Адъювантное действие ГМДП обнаружено как на уровне формирования клона антигенреактивных клеток, так и при определении содержания антител. Действие ГМДП не зависело от способа его введения. Результаты настоящей работы свидетельствуют о способности исследуемого соединения влиять на накопление вируса в легких. Снижение содержания вируса в легких, как можно предположить, не обусловлено его непосредственным антивирусным действием, т.к. при использовании ГМДП in vitro, на культуре переживающей хориоаллантоисной оболочки, не обнаружено снижение титра вируса под действием препарата. На основании выше изложенного показано, что соединение ГМДП обладает иммуностимулирующей активностью в отношении вирионной инактивированной хроматографической вакцины. Иммуностимулирующее действие препарата выявлено на уровне антигенреактивных клеток и гуморальных антител. Наряду с иммуностимулирующим эффектом ГМДП обладает выраженной антиинфекционной активностью в отношении экспериментальной гриппозной инфекции.
Зав. отделом биотехнологии
Профессор Носков Ф.С.
Зав. лабораторией респираторных вирусных инфекций
Профессор Фридман Э.А.
Ст. научный сотрудник К.м.н. Брянцева Е.А.

 

Глава из книги «Синтетические иммуномодуляторы» Т.М. Андроновой, И.М. Дозмарова, М.И. Мустафаева и соавт. – М.: Наука, 1991. – 199 с. – ISBN 5-02-004122-X

Стимуляция неспецифической резистентности против бактериальных и вирусных инфекций

Одной из характерных черт иммуномодуляторов природного происхождения является их способность оказывать протективное действие при экспериментальных инфекциях. В этом плане изучено защитное действие ГМДП* и МДП** при экспериментальных инфекциях у мышей (табл.4). Инфекцию воспроизводили внутрибрюшинным введением суточных культур E.coli, P.aeruginosa, S.aureus в заражающих дозах, вызывающих гибель 100% животных в контрольной группе в течение 24-48 ч. ГМДП л МДП вводили профилактически за 24 ч. до заражения. При этом кратность введения гликопептидов варьировала от 1 до 4 инъекций в сутки. Защитное профилактическое действие иммуномодуляторов оценивали по выживаемости животных в опытных и контроль¬ных группах. Анализ экспериментальных данных позволил сделать вывод о значительном профилактическом протективном действии препаратов. Защитный эффект при экспериментальном колисепсисе зависел от дозы, кратности введения гликопептидов и вида возбудителя. Выживаемость животных повышалась с увеличением числа введений препаратов и достигла максимальных значений при 2—4-кратном введении. При коли-сепенсе зависимость выживаемости от дозы была наиболее выраженной — выживаемость возрастала при повышении дозы до 100 мкг на мышь, и, кроме того, была обнаружена более высокая профилактическая активность ГМДП по сравнению с МДП. При заражении P.aeruginosa показатели выживаемости были примерно одинаковыми, не было установлено четкой дозовой зависимости, однако многократное введение препаратов также было более эффективным по сравнению с однократным. При стафиллококковом сепсисе гликопептиды практически не оказывали протективнго действия.
Таблица 4. Защитное действие (выживаемость, %) ГМДП и МДП при экспериментальных инфекциях

 

Микроорганизм

 

Доза, мкг/животное

 

ГМДП

 

МДП

 

1 раз

 

2 раза

 

4 раза

 

1 раз

 

2 раза

 

4 раза

 

E.coli

 

0,1

 

25

 

20

 

70

 

10

 

20

 

50

 

1

 

25

 

40

 

40

 

50

 

40

 

40

 

10

 

25

 

60

 

100

 

50

 

50

 

70

 

50

 

40

 

50

 

100

 

70

 

50

 

60

 

100

 

60

 

70

 

100

 

70

 

70

 

60

 

200

 

60

 

70

 

100

 

60

 

70

 

70

 

P.aeruginosa

 

0,1

 

50

 

80

 

80

 

70

 

70

 

90

 

1

 

20

 

70

 

60

 

50

 

80

 

100

 

10

 

40

 

50

 

70

 

50

 

80

 

90

 

50

 

40

 

60

 

70

 

40

 

60

 

80

 

100

 

40

 

60

 

60

 

70

 

80

 

80

 

200

 

50

 

70

 

60

 

70

 

60

 

90

 

S.aureus

 

0,1

 

0

 

0

 

0

 

0

 

0

 

0

 

1

 

0

 

0

 

0

 

0

 

0

 

0

 

10

 

0

 

0

 

10

 

10

 

0

 

0

 

100

 

0

 

0

 

0

 

0

 

0

 

0

 

Примечание. В контроле выживаемость животных во всех случаях равна 0. Цифры 1, 2, 4 – количество введений 1 препарата

 

 

Введение ГМДП в разные сроки по отношению к заряженной аллантоисной культурой вируса штамм А/Ленинград/399/76(H3N2) приводит к снижению содержания вируса в легких мышей на два порядка, свидетельствующему о таком же профилактическом эффекте, как и у известных противогриппозных химиотерапевтических препаратов виразола*** и ремантадина.
* - глюкозаминилмурамилдипептид (ГМДП), действующее вещество лекарственного препарата Ликопид
** - мурамилдипептид (МДП)
*** - виразол (рибавирин)